بطور کلی میکروارگانیسمها در محیطهای کشت غنی نسبت به محیطهای معدنی رشد بهتری دارند. چراکه محیطهای غنی حاوی پیش سازهای بیوسنتتیک بوده که می تواند بطور مستقیم به مسیرهای آنابولیک هدایت شود و سبب کاهش نیاز به تولید پیش سازهای بیوسنتزی و صرفه جویی در انرژی متابولیک میشوند. این امر دارای تاثیر معنیداری بر روی رشد است (Hahn-Hägerdal et al, 2005). سیستم دی هیبریدی یک ابزار موفق برای بررسی تعامل پروتئین پروتئین در سلول زنده است (Fields&Songs, 1989).

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

1. cerevisiae اساساً همانند باکتری ها پردازش شده است. کشت ساده، مقرون به صرفه، سریع و بی خطر میباشد. این مخمر در محیط کشت غیر انتخابی و در محیط کشت غنی (عصاره مخمر، پپتون و دکستروز) و محیط کشت انتخابی (بعنوان مثال با مارکرهای انتخابی) در محیط کشت حداقل SD ^[۳۲]حاوی مکملهای تغذیهای مناسب رشد می کند. مکملها سبب افزایش رشد مخمرها با بهره گرفتن از اسیدآمینهها و پیش سازهای نوکلئوتیدی میشوند (Sherman , 1991 ؛ ۱۹۹۳ Lundbad, Treco&). اجزاء محیط کشت حداقل بجز مکمل های غذایی بخوبی تعریف شده است (Bia&Elledge, 1997).

۱-۵-۷-۱ محیط کشت YPD
محیط کشت YPD^[33] بنام YEPD نیز شناخته می شود که این محیط کشت از عصاره ی مخمر^[۳۴]، پپتون^[۳۵] و دکستروز^[۳۶] تشکیل شده و معمولاً برای رشد مخمر S. cerevisiae در شرایط غیر انتخابی (به عنوان مثال زمانیکه نگهداری پلاسمید انتخابی مورد نیاز نمی باشد)، استفاده می شود و می تواند برای پژوهش کاربردی که نیازمند محیط کشت مایع مخمری است همانند بیان پروتئین و کلونینگ و … مخمرها مورد استفاده قرار گیرد. این محیط اسیدآمینهها، پیش سازهای نوکلئوتیدی، ویتامینها و متابولیتهای ضروری مورد نیاز برای رشد بهینه سلول را فراهم می کند (www.springer.com) (شکل ۱-۹).
شکل ۱- ۹ محیط کشت جامد و مایع YPD( en.wikipedia.org )
در محیط کشت جامد YPD در دمای ۳۰ درجه تک کلنیها ممکن است پس از ۲۴ ساعت دیده شوند اما بطور کلی حداقل ۴۸ ساعت برای رشد زمان لازم است (www.springer.com).
ترکیب محیط کشت غنی بخوبی تعریف شده است، در عین حال برخی گونه های جهش یافته در محیطYPD به طور متفاوتی رشد می کنند (Bia&Elledge, 1997؛ James et all, 1996 ) (جدول ۱-۱).
جدول ۱-۱ محتویات محیط کشت YPD

غلظت نهایی گرم بر لیتر
عصاره ی مخمر ۱%	۱۰
پپتون۲%	۲۰
دکستروز( گلوکز)۲%	۲۰
آگار( برای محیط جامد)	۲۰

عصاره مخمر موجود در آن برای تامین ویتامینها و سایر مواد مغذی بکار میرود. پپتون برای شکستن پروتئینها کاربرد دارد. گلوکز یا دکستروز منبع تامین انرژی برای مخمر است (www.clontech.com).
سلولهای مخمر هر ۹۰ دقیقه یکبار در محیط کشت YPD در طول فاز نمایی^[۳۷] چرخه ی رشد، تقسیم میشوند (Sherman , 1991؛ ,۱۹۹۳ Lundbad&Treco). YPD می تواند بعنوان یک محیط جامد یا مایع با افزودن آگار به غلظت نهایی ۲% ، تهیه گردد ( Bia&Elledge, 1997؛ James et all, 1996).
۱-۵-۷-۲ محیط کشت YPAD
با افزایش آدنین^[۳۸] به محیط YPD محیط YPAD ایجاد می شود. این محیط سبب افزایش رشد برخی از سویههای دی هیبریدی مخمر می شود. سویههای مخمری با جهش در ژن ADE2 سبب تجمع رنگدانههای قرمز و قابل دید، مانند کلنیهای قرمز میشوند (Fisher , 1969 ). تجمع رنگدانهها رشد را کند می کند (et al, 1998 Dela Cruz). افزودن آدنین نشان میدهد که تجمع رنگدانههای قرمز اشاره به کاهش سرعت رشد دارد (Sherman , 1991).
در برخی از سلولها، به خصوص آن دسته ازگونههای حاوی یک جهش ade، آدنین ممکن است به YPDاضافه گردد (YPAD). فرمول سنتز کامل محیط کشت، در مقدار آدنین متفاوت میباشد طوری که در برخی از آنها مقدار آدنین به حدی زیاد است که کلنیها هرگز به رنگ صورتی یا قرمز دیده نمیشوند (Fisher , 1969 ) (جدول ۱-۲ و شکل ۱-۱۰).
جدول ۱-۲ محتویات محیط کشت YPAD